基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

A、切割质粒的限制性核酸内切酶可特异性识别4、5、6或8个核苷酸序列，A错误；

B、PCR技术采用不同的温度是为了变性、复性和延伸，B错误；

C、载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为筛选标记基因，C错误；

D、抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达，因此还需要进行目的基因的检测和鉴定，D正确。

故选ABC。