生物学实验中，有些实验需要保持细胞活性，如观察细胞质环流、观察细胞中的线粒体、观察植物细胞质壁分离及复原等实验，而观察洋葱根尖分生区细胞的有丝分裂时，由于经解离后细胞已经死亡，故看到的是死细胞；观察细胞中DNA和RNA的分布实验中，实验材料经过盐酸处理后，细胞也会死亡。

①用黑藻观察细胞质流动，需要细胞保持活性，①正确；

②健那绿为活性染料，需要细胞保持活性才能给线粒体染成蓝绿色，故观察线粒体需要细胞保持活性，②正确；

③用甲基绿和吡罗红染色观察洋葱细胞中的DNA和RNA时，8%的盐酸处理后细胞已经丧失活性，③错误；

④只有活细胞才能发生质壁分离，因此用洋葱细胞观察质壁分离和复原，需要细胞保持活性，④正确；

⑤用龙胆紫染色观察洋葱根尖分生区细胞的有丝分裂，在解离过程中细胞已死亡，⑤错误。

故选B。