1、
真核生物细胞内,大量DNA和蛋白质以及一些RNA等混杂在一起,难以分离.生物兴趣小组的同学为了获得纯度相对较高的DNA展开了实验探究.
(1)分离各种物质的基本思路是根据DNA和其他物质理化性质的不同而采取一定的方法,如图是从各种物质之间______的差异角度开展研究: a、取鸡血细胞悬液10mL,加蒸馏水20mL,同时用玻璃棒______(填“轻轻搅拌”或填“快速搅拌”).过滤,取滤液,转移到塑料材质的大烧杯中.
b、沿大烧杯内壁持续、缓慢地加入饱和硫酸铵溶液,用玻棒沿一个方向______(填“轻轻搅拌”或填“快速搅拌”),同时不断收集析出的物质.
如图是根据鸡血中几种物质的析出情况绘制的曲线,请据图分析:
c、如果只要收集纤维蛋白,可采取的措施是______ .
d、先用饱和度40%的硫酸铵溶液析出绝大部分纤维蛋白和大部分球蛋白,再在饱和度约为______的硫酸铵溶液中析出DNA(既保证DNA提取量较大又避免其他杂质过多),与此同时析出的物质还有______ .
(2)如果要进一步去掉其他杂质,尽可能提高获得的DNA纯度,可采取的两种办法有:将DNA与球蛋白的混合物加入到______中,收集再次析出物;用______处理溶有DNA与蛋白质的溶液.
(1)溶解度;快速搅拌;轻轻搅拌;在硫酸铵浓度达到30%之前收集析出物;50%;球蛋白
(2)冷却酒精;嫩肉粉(木瓜蛋白酶)
解:(1)分析曲线图可知,不同物质在不同浓度的硫酸铵中的析出的相对量有所差别,即分离各种物质的基本思路是根据DNA和其他物质之间溶解度的差异角度开展研究:
a、取鸡血细胞悬液10mL,加蒸馏水20mL,此时可以用玻璃棒快速搅拌,以加速血细胞的破裂.
b、沿大烧杯内壁持续、缓慢地加入饱和硫酸铵溶液,为了防止将DNA的絮状物搅碎,此时应用玻棒沿一个方向轻轻搅拌,同时不断收集析出的物质.
c、图中看出,纤维蛋白的溶解度最低,硫酸铵浓度在20%之前已经开始析出,说明溶解度开始减小;在浓度为30%时析出最快,说明此时的溶解度最低,并且超过30%后球蛋白也将逐渐析出,因此如果只要收集纤维蛋白,可以在硫酸铵浓度达到30%之前收集析出物.
d、图中看出,DNA在饱和度约为50%的硫酸铵溶液中溶解度最小,与此同时析出的物质还有球蛋白,只是球蛋白析出量较少.(2)如果要进一步去掉其他杂质,尽可能提高获得的DNA纯度,可将DNA与球蛋白的混合物加入到冷却酒精中,由于DNA不溶于酒精,而其它杂质可溶于酒精,因此收集再次析出物;酶具有专一性,可以用嫩肉粉(木瓜蛋白酶)处理溶有DNA与蛋白质的溶液,此时蛋白质可以水解,因此可以分离DNA和蛋白质;又由于DNA和蛋白质对高温的耐受性不同,蛋白质容易将溶有DNA与蛋白质的溶液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温一段时间.
所以答案是:(1)溶解度 a、快速搅拌 b、轻轻搅拌 c、在硫酸铵浓度达到30%之前收集析出物 d、50% 球蛋白(2)冷却酒精 嫩肉粉(木瓜蛋白酶)
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